Hvad er formålet med det primære antistof i en Western blot?
Hvad er formålet med det primære antistof i en Western blot?

Video: Hvad er formålet med det primære antistof i en Western blot?

Video: Hvad er formålet med det primære antistof i en Western blot?
Video: Probe the Western blot for your target proteins using primary and secondary antibodies 2024, Juli
Anonim

Med metoden til direkte detektion konjugeres et enzym- eller fluorofor-konjugeret primært antistof bruges til at detektere antigenet af interesse på blot . I den indirekte detektionsmetode er en umærket primært antistof bruges først til at binde til antigenet.

Hvad er endvidere primært antistof i Western blot?

Det primært antistof genkender og binder epitopen eller den specifikke aminosyresekvens af proteinet af interesse. Sekundær antistoffer anvendes til western blotting er typisk konjugeret med et enzym; de mest almindeligt anvendte enzymer er Horse Radish Peroxidase (HRP) og Alkaline Phosphatase (AP).

Hvad gør det primære antistof derudover? Primære antistoffer er immunglobuliner, der binder til et specifikt antigen ( protein , peptid, lille molekyle osv.) af interesse og er typisk ukonjugerede. Et godt primært antistof genkender og binder med høj affinitet og specificitet til at rense, detektere og måle antigenet.

Hvad er derfor formålet med en Western blot?

EN western blot er en laboratoriemetode, der bruges til at detektere specifikke proteinmolekyler blandt en blanding af proteiner. Dernæst adskilles proteinmolekylerne efter deres størrelse ved hjælp af en metode kaldet gelelektroforese. Efter adskillelse overføres proteinerne fra gelen til a blotting membran.

Hvordan bruges antistoffer i Western blotting?

Antistoffer er Brugt at detektere målproteiner på western blot (immunoblot). Det antistoffer er konjugeret med fluorescerende eller radioaktive mærker eller enzymer, der giver en efterfølgende reaktion med et påført reagens, hvilket fører til en farve eller emission af lys, hvilket muliggør detektion.

Anbefalede: